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Tesis de Pregrado - Ingeniería Forestal

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https://repositorio.uteq.edu.ec/handle/43000/72

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Browsing Tesis de Pregrado - Ingeniería Forestal by Author "Acosta Lucas, Karen Cristina"

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    Establecimiento de una metodología para la extracción y purificación de ADN genómico de Gmelina arbórea Roxb.
    (Quevedo : UTEQ, 2014) Acosta Lucas, Karen Cristina; Nieto Rodriguez, José Enrique
    La presente investigación se realizó en el Laboratorio de Biología Molecular de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo (UTEQ) ubicada en la Av. Quito km ½ vía a Santo Domingo de los Tsáchilas. Las muestras colectadas fueron hojas y raíces de melina de la finca experimental “La Represa”, ubicada en el Km. 13 vía Quevedo – San Carlos Rcto. Fayta, propiedad de la UTEQ. EL objetivo fue optimizar una metodología de extracción y purificación de ADN genómico de Gmelina arbórea Roxb (melina) para su empleo en futuros análisis genéticos. Para la extracción de ADN de alta calidad se evaluaron cuatro protocolos que fueron: Uyemoto et al. 1998; Doyle & Doyle 1990 y el kit DNeasy Plant Mini. Se empleó un Diseño de Bloques Completamente al Azar (DBCA) con arreglo bifactorial: el primer factor fueron los tres protocolos y el segundo factor fueron hojas y raíces provenientes de árboles adultos, jovenes y plántulas con cuatro repeticiones. Para determinar diferencias entre medias se usó la prueba de Tukey (P<0.05). De los protocolos evaluados para la extracción del ADN, el mejor (en cantidad) fue el kit DNeasy Plant Mini utilizando como fuente de tejido la parte radicular de los arboles jóvenes de melina con 713,42 ngL-1. En cuanto a la calidad el protocolo kit DNeasy Plant Mini muestra un ADN medio con 59,17 por ciento, y proviniendo desde hojas de plántulas donde se obtuvo una media de 73,33 por ciento con una calidad alta de ADN. Los nueve iniciadores empleados para realizar la amplificación del ADN en tejidos de melina; y evaluando dos mezclas; a) solo se obtuvo reacción con los iniciadores OPA13, OPA 07 (2004 y 2008) y OPC8, b) de la unión de dos iniciadores resultó reacción entre OPA 03 con OPA 14 y OPA 07 con OPC 13 y el OPA 07 con el OPA 04.